安捷(jie)倫 Cary 60 紫外-可(ke)見(jian)分光光度(du)計(ji)測(ce)定(ding) 4°C下微量(liang) DNA 的(de)純(chun)度(du)

在(zai)之(zhi)前的(de)文(wen)章(zhang)中(zhong)，我們(men)介(jie)紹(shao)了(le)安捷(jie)倫 Cary 50 紫外-可(ke)見(jian)分 光光度(du)計(ji)配(pei)置  Hellma（德國(guo)  Hellma GmbH & Co.）的(de) Traycell 微量(liang)比(bi)色

池紫外-可(ke)見(jian)在(zai)室溫(wen)下準(zhun)確、可(ke)重現(xian)地測 定(ding)微量(liang) DNA 的(de)方(fang)法(fa) 3。在本(ben)研(yan)究(jiu)中(zhong)，我們(men)采用帶光纖探(tan)頭(tou)的 Cary 60 紫外-可(ke)見(jian)分光光度(du)計(ji)進(jin)

行(xing)了(le)方(fang)法(fa)擴(kuo)展研(yan)究(jiu)，在(zai) 4 。C 以(yi)及(ji)普通實(shi)驗(yan)室環(huan)境光(guang)照(zhao)條(tiao)件(jian)下測(ce)定(ding)了(le)小體(ti)積(ji)樣品(pin)。本方(fang) 法(fa)使得(de)用(yong)戶可(ke)以(yi)將(jiang)儀(yi)器靠近樣品(pin)，而(er)不(bu)是(shi)像(xiang)傳(chuan)

統光譜方(fang)法(fa) 那樣將(jiang)樣品(pin)放入(ru)儀(yi)器中(zhong)，從而(er)能夠(gou)在很(hen)短的(de)時間(jian)內完成(cheng)分 析。Cary 60 的光(guang)學(xue)設(she)計(ji)使這壹優勢(shi)得(de)以(yi)實(shi)現(xian)，它主(zhu)要(yao)憑 借(jie)

其的高強(qiang)度(du)閃(shan)爍氙(xian)燈以(yi)及(ji)最(zui)新型的(de)電子(zi)器件，使(shi)系(xi) 統能夠(gou)有效地監(jian)控吸(xi)光(guang)度(du)的(de)微小(xiao)變(bian)化(hua)而(er)不(bu)受環(huan)境(jing)背景光的(de) 任何(he)影響(xiang)。本文(wen)深入(ru)

討(tao)論(lun)了(le)這壹方(fang)法(fa)的主(zhu)要(yao)優(you)點(dian)。

儀(yi)器與(yu)材料(liao)

方(fang)法(fa)與(yu)結(jie)果(guo)

將小(xiao)牛(niu)胸(xiong)腺(xian) DNA 用純(chun)凈水（MilliQ）稀釋得(de)到不(bu)同(tong)濃(nong)度(du)的(de)樣 品(pin)，濃(nong)度(du)範(fan)圍(wei) 0–50 µg/ml。

配(pei)有光纖耦(ou)合器以(yi)及(ji)微探(tan)頭(tou)的 Cary 60, 如(ru)圖(tu) 1 所示。在 Eppendorf 管中(zhong)加入(ru) 150 µL 純(chun)凈水（MilliQ），將其讀數(shu)作為(wei) 空(kong)白(bai)。

由於(yu)分子(zi)生物學試劑通常(chang)保(bao)存於(yu)冷(leng)藏(zang)條(tiao)件(jian)下，因(yin)此所有樣 品(pin)直接(jie)從(cong) 4 。C 冰(bing)箱中(zhong)取出並進行(xing)分析。

圖(tu) 1. 配(pei)有光纖附件(jian)的(de) Cary 60 測(ce)試 4 。C 下 Eppendorf 管(guan)中(zhong) 150 μL DNA 的示(shi)意 圖(tu)。

開(kai)始時，使(shi)用 WinUV 軟件“掃(sao)描"模塊(kuai)在 340 到 240 nm 範(fan) 圍(wei)進行(xing)掃描以(yi)確認最(zui)大吸(xi)收峰以(yi)及(ji)所購買的按 50:50 稀釋 的(de) DNA 樣品(pin)的可(ke)靠(kao)性(xing)（圖(tu) 2）。

圖(tu) 2. 對(dui) 4 。C 下兩(liang)個濃(nong)度(du)的(de) 150 µL DNA 樣品(pin)的掃(sao)描表明特(te)征(zheng)吸(xi)收峰出現(xian)在 260 nm 處(chu)。註(zhu)意(yi)：50 µg/ml DNA 最(zui)大吸(xi)光(guang)度(du)值 1.0Abs，25 µg/ml DNA 最(zui)大吸(xi)光(guang)度(du) 值 0.5Abs，遵守(shou) Beer Lambert 定(ding)律(lv)（A = εcl）。

為(wei) 了(le) 確 認  DNA  的(de) 純(chun) 度(du) ，使(shi) 用(yong)   WinUV  軟 件 專(zhuan) 門 的 “RNA/DNA"模塊(kuai)測(ce)定(ding) 260/280 比(bi)率(lv)，該模塊可(ke)自(zi)動計算 DNA 樣品(pin)的純(chun)

度(du)。如(ru)圖(tu)3 所示，這壹模塊(kuai)使(shi)用非常(chang)簡單(dan)，可(ke) 以(yi)在(zai)壹分鐘(zhong)內完成(cheng)分析。

圖(tu) 3. 簡便(bian)、專(zhuan)用的 Cary WinUV 自(zi)動計算 DNA 的純(chun)度(du)、可(ke)靠(kao)性(xing)和濃(nong)度(du)

最(zui)後(hou)，繪(hui)制(zhi)濃(nong)度(du)曲(qu)線以(yi)評(ping)估同(tong)壹實驗(yan)室條(tiao)件(jian)下不(bu)同(tong)濃(nong)度(du) DNA 樣品(pin)讀數(shu)的線性(xing)和重現(xian)性(xing)（圖(tu)4）。在(zai)兩個 DNA 樣品(pin)讀 數(shu)間隙使

用(yong) MilliQ 純凈水清洗(xi)微探(tan)頭(tou)。

討(tao)論(lun)

測定(ding)五個樣品(pin)所用的時間(jian)不到兩(liang)分鐘(zhong)。傳(chuan)統方(fang)法(fa)使用(yong)微量(liang) 比(bi)色皿，需要等待(dai)樣品(pin)加熱(re)至(zhi)室溫(wen)，而(er)且(qie)在每(mei)兩(liang)次(ci)測定(ding)間 需要清洗(xi)微量(liang)比(bi)色

皿。總(zong)之，使用 Cary 60 光纖系(xi)統可(ke)以(yi)顯(xian) 著(zhu)降低大約(yue) 80% 的(de)分析時間(jian)，同時采(cai)用光(guang)纖技術不易受(shou)到 樣品(pin)處理引(yin)起(qi)的潛(qian)在汙染。使(shi)用(yong)微

探(tan)頭(tou)可(ke)以(yi)獲(huo)得(de)高精度(du)的(de) 數(shu)據並(bing)大大縮(suo)短(duan)測定(ding)低溫(wen)樣品(pin)所需的時間(jian)，這表明 Cary 60 是(shi)壹種(zhong)適(shi)於(yu)測(ce)定(ding)生物樣品(pin)（如(ru) DNA）的(de)簡便(bian)、快速且

高性(xing)價 比(bi)的(de)系(xi)統。本方(fang)法(fa)可(ke)以(yi)輕(qing)松(song)地直接(jie)擴(kuo)展到其它樣品(pin)類(lei)型(xing)， 例如(ru)可(ke)在(zai) 280 nm 處(chu)測定(ding)蛋(dan)白質。

結(jie)論(lun)

Cary 60 紫外-可(ke)見(jian)分光光度(du)計(ji)是(shi)使(shi)用(yong)光纖采樣的(de)理想儀(yi)器， 它的(de)高強(qiang)度(du)閃(shan)爍氙(xian)燈可(ke)以(yi)提(ti)供(gong)的(de)靈敏度(du)和重現(xian)性(xing)。 本(ben)應(ying)用報(bao)告所展示(shi)的測

定(ding) DNA 樣品(pin)時的(de)分析速度(du)、結(jie)果(guo)重  現(xian)性(xing)以(yi)及(ji)易用(yong)性(xing)證明了(le)該儀(yi)器系統的強大優(you)勢(shi)。

使用帶(dai)光纖(xian)的(de) Cary 60 分析生物樣品(pin)還(hai)具(ju)有如(ru)下優(you)點(dian)：

•     可(ke)以(yi)直(zhi)接測(ce)定(ding)高溫(wen)或低溫(wen)樣品(pin)（4 °C – 110 °C）而(er)無(wu)需 考慮(lv)冷(leng)凝(ning)的問(wen)題，如(ru)果(guo)使用(yong)比(bi)色皿則由於(yu)冷(leng)凝(ning)可(ke)能導(dao) 致結果(guo)不正(zheng)確或重現(xian)性(xing)不(bu)好

•     樣品(pin)體(ti)積(ji)不受(shou)限(xian)制(zhi)，可(ke)以(yi)低至(zhi) 40 µL，也(ye)可(ke)以(yi)無(wu)限(xian)大

•     無(wu)需購買昂(ang)貴(gui)的(de)石英(ying)微量(liang)比(bi)色皿，更(geng)節省了(le)清洗(xi)比(bi)色 皿的時間(jian)

•     使用(yong)反(fan)射探(tan)頭(tou)還(hai)可(ke)以(yi)分析固體(ti)、粉(fen)末(mo)或(huo)凝(ning)膠(jiao)類(lei)樣品(pin)

圖(tu) 4. 使(shi)用微探(tan)頭(tou)光纖附件在實(shi)驗(yan)室常(chang)規(gui)光(guang)照(zhao)條(tiao)件(jian)下測(ce)定(ding) 4 °C 下 Eppendorf 管(guan)中(zhong) 50 µL DNA 樣品(pin)（0–

50 µg/mL）得(de)到的(de)濃(nong)度(du)曲(qu)線。校(xiao)準方(fang)程：Abs = 0.02393*濃(nong) 度(du)；相(xiang)關(guan)系(xi)數(shu) = 0.99126。